一、病原微生物检测
(一)显微镜检查
1.革兰染色
【临床意义】
急、慢性淋菌性尿道炎时阴道、尿道分泌物或淋菌性结膜炎时眼分泌物,革兰染色镜检可见多形核粒细胞内革兰阴性卵圆形或肾形成对排列双球菌。若在涂片中见革兰阴性短杆菌,呈鱼群排列,可能为杜克嗜血杆菌感染。
【评价】
泌尿生殖系统分泌物多形核粒细胞内革兰阴性卵圆形或肾形成对排列双球菌对对于有症状的。男性患者可做出淋病诊断,对女性患者须排除与淋病奈瑟菌形态相似的正常寄生的其他奈氏菌,方可作出诊断。
2.姬姆萨染色
【临床意义】
宫颈拭子或刮片姬姆萨染色检查时,见到上皮细胞内蓝色或暗紫色的包涵体,为衣原体感染。
【评价】
该方法敏感性低(仅为40%),以衣原体荧光抗体染色涂片,阳性者可见细胞内散在点状荧光,敏感性较高。
3.镀银染色及暗视野显微镜检查
【临床意义】
下疳渗液标本镀银染色找到棕黑色螺旋体,提示为梅毒螺旋体感染。悬滴标本暗视野显微镜下查到细长、有动力的密螺旋体,提示为梅毒螺旋体感染。
【评价】
该方法可用于早期梅毒(一期梅毒和二期梅毒早期)螺旋体检查,特异性强,结合临床表现阳性可做出诊断,但阴性不能排除。
4.瑞氏染色
【临床意义】
疱疹病毒感染时,疱疹基底组织刮片做瑞氏染色,可见多核巨细胞和核内嗜酸性包涵体。
【评价】
此法敏感性低,且不能区分HSV和VZV感染。
(二)分离培养和鉴定
1.细菌分离培养和鉴定 根据可疑感染病原体的培养特性,选择合适的培养基,如淋病奈瑟菌接种GC培养基,杜克嗜血杆菌接种含X因子Muller-Hinton琼脂培养基,解脲脲原体和人型支原体接种Shepard 10B肉汤和A8琼脂平板,分离培养,做出最终鉴定。对不能在人工培养上生长立克次体、衣原体可将标本接种组织细胞或易感动物,如衣原体应用McCoy细胞或HeLa229细胞培养,观察增殖指标并用血清学等方法作出最后鉴定。
【临床意义】
①淋病奈瑟菌培养阳性,可诊断为淋病;②杜克嗜血杆菌培养阳性,可诊断为软下疳;③解脲脲原体和人型支原体培养阳性,需结合临床表现,且菌落计数>104CFU/ml,具有临床意义;④胞质内包涵体检查阳性示可能为衣原体感染。
【评价】
分离、培养和鉴定是确诊性传播性疾病的可靠的方法。当怀疑有淋菌性关节炎时,应该做血液培养。沙眼衣原体传统的培养法已逐渐被非培养方法代替(如核酸检测),现在培养临床标本中的衣原体只能在专业的实验室进行。
2.病毒的分离培养及鉴定
(1)HIV的分离培养:将HIV感染者的外周血单个核细胞、血浆或全血与正常人的外周血单个核细胞共培养后,病毒可在细胞内大量增殖,通过检测培养上清中HIV反转录酶活性或P24抗原含量等,判断病毒分离培养是否成功。
【临床意义】
HIV病毒分离培养临床不做常规诊断项目,多用于科研。可用于HIV感染窗口期的辅助诊断、HIV抗体不确定或阳性母亲所生婴儿早期的鉴别诊断,但不能据此确诊。
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