肺孢子虫病的实验诊断

        卡氏肺孢子菌(pneumocystis carinii，PC)曾称为卡氏肺孢子虫卡氏肺孢子菌于1909年、1910年由Chagas和Carinii两位学者分别在感染枯氏锥虫的豚鼠肺脏组织和感染路氏锥虫的大鼠肺脏切片中发现。为纪念Carinii而命名为卡氏肺孢子菌。1952年捷克学者从患间质浆细胞性肺炎而死的16例小儿的肺渗出液中都找到该菌，因而确认它是引起这种肺炎的病原体。1981年以来，PCP成为艾滋病患者最常见的机会性感染，并是其致死的主要原因，从而引起人们重视。卡氏肺孢子菌可寄生于人和其他哺乳动物的肺组织内，广泛分布于自然界，比如土壤和水等。卡氏肺孢子菌主要通过空气传播，寄生于鼠、犬、猪、羊、兔等的肺上皮细胞中引起肺孢子菌性肺炎。

　　【临床表现】

　　临床一般表现为干咳、呼吸困难、发绀、精神不安，咳嗽几乎无痰，肺部无明显的啰音。X线显示两肺弥漫性阴影或斑点状阴影。急性期时，血沉快，原发病加重，如诊断不及时，2～6周内死亡。

　　【实验诊断】

　　一、标本直接检测

　　1．直接显微镜检测  收集病人痰液或支气管肺泡灌洗液、肺活检组织中检测PC是确诊的重要依据。收集痰液或支气管分泌物涂片染色后镜检，取材方便但检出率很低，可反复多次检测，若应用支气管冲洗术可提高检出率。经皮穿刺肺活检、支气管镜肺活检或开胸肺活检，虽检出率高，但损伤大，一般不应首选，仅限于痰液及支气管肺泡灌洗多次阴性但临场高度怀疑者。常用的染色方法有姬姆萨染色、果氏环六亚甲基四胺银染色和亚甲胺蓝染色。涂片姬姆萨染色后镜检，可见包囊内8个囊内小体，胞质呈浅蓝色，核1个呈紫红色；亚甲胺蓝染色后镜检，包囊囊壁呈深褐色或黑色，囊壁可见特征性括弧样结构，囊内小体不着色。

　　2．抗原检测  用荧光或胶体金标记的单克隆抗体检测患者血清中卡氏肺孢子菌抗原，有较好的敏感性和特异性。

　　3．免疫学诊断  常用方法为IFA、ELISA或补体结合试验。但由于大多数正常人都曾有过肺孢子虫隐性感染，血清中都有特异性抗体存在，故检测血清抗体的方法诊断意义不大。

　　【评价】

　　形态学检测是主要的检测方法，也是肺孢子虫感染的金标准。

　　二、核酸检测

　　分子生物学诊断技术适用于卡氏肺孢子菌诊断，目前应用PCR法已将卡氏肺孢子菌线粒体中的5SrDNA和16SrDNA扩增成功。近年来，DNA探针、rDNA探针和PCR技术检测无创性标本，已试用于肺孢子虫病诊断，显示有较高的敏感性和特异性。有学者建议将PCR法和基因探针联合用于卡氏肺孢子菌的诊断。

　　【评价】

　　核酸检测在寄生虫疾病中的作用和意义不是很大，但明显适用于隐性感染。