造血干细胞移植后的监测评估实验

       一、造血干细胞的功能监测

       1．全血细胞计数和骨髓检查  移植后28天全血细胞减少，骨髓空虚或增生减低，中性粒细胞＜（0.1～0.5）×109／L或移植后21天中性粒细胞＜0.1×109／L，则视为移植失败。植入失败的早期识别标准为移植后14～16天WBC≤0.2×109／L。

       2．移植后嵌合状态检测  清髓性异基因移植的受者，移植后75天左右检测嵌合状态。移植后其他时间点的嵌合体检测要根据患者的情况，适应证包括不明原因的粒细胞缺乏和移植后疾病复发等。

       3．其他  监测电解质、血糖、肌酐、尿素氮、血钙、镁、磷酸盐、白蛋白、胆红素、谷草转氨酶、碱性磷酸酶、乳酸脱氢酶等项目。

       二、移植术后实验检测

       造血干细胞移植后除需进行常规术后监测外，还需检测供受者的嵌合状态及对移植物抗宿主疾病（graft versus host disease，GVHD）进行监测，并监测受者骨髓象。

       1．移植后嵌合状态检测  造血干细胞移植后通常是供者的造血干细胞植入，受者细胞消失。造血干细胞移植后供受者嵌合状态检测是评价植入状态的有效指标。移植后应根据具体情况选择敏感有效的方法连续动态地监测供受者的嵌合状态。

       红细胞血型不同的供受者，移植后如受者血型变为供者血型，表明移植成功，但此方法敏感性不高，一般要移植后4～6个月才会发生转换；性别不同的供受者，最敏感的方法是原位免疫荧光杂交（FISH）检测供受者细胞的X和Y染色体；但上述方法的应用受到一定的限制，目前判断植入成功可检测DNA的短串联重复序列的变异数目、限制性片段长度多态性、可变串联重复序列，这些方法不仅敏感性好且应用范围大。

       2．移植物抗宿主疾病的实验室检测GVHD是骨髓移植受者的主要并发症及死亡原因。GVHD分为两大类：急性和慢性。以往是用发生的时间来区分急性和慢性GVHD，近来NIH专家共识工作组的资料建议以临床表现而不以移植后症状出现的时间作为划分标准。

      （1）急性GVHD：急性GVHD的主要靶器官为皮肤、肝脏及胃肠道，血细胞也可为GVHD的靶细胞，导致全血细胞数量下降。对于急性GVHD的诊断和鉴别诊断需做以下检查：血常规、便常规、肝脏功能、CMV抗原和抗体及便培养。

      （2）慢性GVHD：慢性GVHD是一种全身多器官损害性疾病，反复感染常是慢性GVHD发生的征兆。巨细胞病毒血清学阳性或外周血干细胞输注中CD34＋细胞数较高是发生慢性GVHD的可能危险因素。以前将慢性GVHD可分为局限性和广泛性两型，近来NIH共识工作组推荐以器官系统分级作为新的临床评分体系。血小板降低及高胆红素血症或疾病进行性发展均提示预后不佳。

       3．骨髓象检查  造血干细胞移植术后应定期进行骨髓象监测，一般移植后第40天骨髓涂片检查：有核细胞增生活跃；粒／红比例基本正常，为3～4：1；红细胞系统中以中、晚幼红细胞为主；红细胞形态与大小正常；巨核细胞通常为3个左右，血小板少。

       三、移植后嵌合状态检测方法的进展

       随着造血干细胞移植工作的不断深入，移植植入监测的方法也随之发展起来。近年来发展起来的变性高效液相色谱（denaturing high-performance liquid chromatography，DHPLC）对PCR产物定量检测具有快速、准确、无污染等优势，成为检测造血干细胞移植物短串联重复序列有效的新方法。DHPLC与基于PCR的短串联重复序列测定技术相结合为移植后植入嵌合状态的检测开辟出一个新的领域。随着分子生物学技术和生物化学等学科的不断发展，灵敏度更好的方法不断涌现，从而更好地为指导移植后的临床干预措施提供准确及时的信息。