弓形虫病的实验诊断

　　1908年法国人Nicolle、Manceaux在刚地梳趾鼠的肝脾单核细胞中发现该虫种，因其滋养体呈弓形，故命名为刚地弓形虫。人主要因食入未熟的受污染畜禽的肉、奶、蛋等感染。也可因食入被猫粪污染的食物、饮水而感染，其所有器官均受到损害，临床表现较为复杂。成人弓形虫感染多呈无症状的带虫状态。但孕妇感染无论有无临床症状均可能造成胎儿宫内感染，常致畸胎、死胎，存活者也常有畸形、弱智及发育障碍。目前，弓形虫病调查、诊断的方法有病原学方法、免疫学方法、分子生物学方法，其中免疫学方法是比较常用方法。同时还有影像学检测。磁共振成像(MRI)发现典型的脑组织改变被认为是弓形虫脑病的确诊指标之一。

　　【临床表现】

　　由于弓形虫寄生在宿主的有核细胞内，机体的各个部位或脏器都有可能受到损害，故弓形虫病在临床上表现为多种多样，缺乏特异性。具体临床表现主要取决于弓形虫的寄生部位、机体的反应性及其病损程度。因此，在进行临床诊断时，须根据就诊对象和具体临床表现仔细地加以分析、判断。

　　可以表现为：妊娠或生产异常早产、流产或死产；脑积水或小头畸形；智力发育障碍；脑膜脑炎；脑内钙化灶；弓形体眼病；神经和精神症状可表现为运动障碍、癫痫、精神异常等。其他还可表现为发热、皮疹、肺炎、肝脾肿大、黄疸、消化道症状等。轻度感染病人，可能只表现为视网膜脉络膜炎、轻度精神或智力障碍。严重的先天性本病则可以出现所谓四联征，即视网膜脉络膜炎、脑积水、抽搐和脑内钙化。

　　【实验诊断】

　　在寄生虫病诊断中，病原学检测是寄生虫感染确诊的主要依据。因此有条件获取弓形虫病原的都不应轻易放弃该检测环节，这也是寄生虫实验诊断的一条基本原则，如在送检的标本中检测出弓形虫虫体，则可以确诊。目前确诊送检标本中是否有弓形虫虫体有以下方法：

　　一、涂片染色法

　　取急性期患者的腹水、羊水、脑脊液、骨髓液或血液等离心后取沉淀物作涂片。也可采用活组织穿刺物涂片，经姬氏染液染色，镜检弓形虫滋养体，一般用于急性感染的确诊。慢性感染一般通过银染色检测包囊壁和PAS染色缓殖子确诊。

　　【评价】

　　常规染色方法常会造成虫体辨识困难，轻度感染可能出现假阴性结果，应反复检测避免漏诊。目前有免疫荧光染色法，值得推广应用。

　　二、动物接种分离法或细胞培养法

　　将待检样本（一般为患者的组织或体液）接种于小鼠腹腔，一周后剖杀，取腹腔液镜检滋养体。阴性者需要盲目传代三次以上。

　　【评价】

　　不适合常规实验室应用。

　　三、免疫学诊断

　　由于从患者样本中直接检测出弓形虫比较困难，因此免疫学检测一直是最常用的方法，其中染色实验、间接血凝试验、酶联免疫吸附试验等，均有较好的特异性和敏感性。

　　1．染色试验(DT)  该方法是弓形虫病所特有的免疫血清反应诊断方法。其原理是弓形虫在与阴性血清作用后仍能被碱性亚甲蓝染液深染，但与阳性血清（抗体）作用后则不着色或着色很淡。据此便可判断被检者血清中是否含有弓形虫抗体。该法的优点是特异性强敏感性高，感染后数天即可出现这种抗体，可用于早期诊断，缺点是所用抗原为活虫，安全性差，辅助因子较难获得。

　　2．间接血凝试验(IHA)  其临床意义在于弓形虫病的IHA一般在病后1个月左右出现阳性。血清抗体效价1︰64为既往感染，1︰256可能为近期感染，1︰1024为现在急性感染。IHA操作简便，敏感性高，适用于现场检测，可用以辅助诊断及作为流行病学调查和综合查病的方法，缺点是重复性差致敏红细胞不稳定。

　　3．酶联免疫吸附试验(ELISA)  该法利用酶的高催化效率，显著放大反应效果，使检测灵敏度大大提高。现已建立并应用了实验动物弓形虫ELISA检测方法，发现IgG  ELISA 检测抗弓形虫抗体检测方法具有较好的敏感性及特异性，结果客观，易于定量等特点，可推广应用于实验动物弓形虫抗体的检测。还有研究者采用间接免疫荧光抗体试验(IFA)、补体结合试验(CT)、胶乳凝集试验(LA)等方法检测血清弓形虫抗体。