申万宏源液态活检行业分析，CTC和ctRNA技术将成新蓝海

　　世界医疗网讯   近日，申万宏源的分析师通过调研，发布了报告《液体活检：精准医疗新蓝海》。本文精选了报告的部分内容。

　　(一)技术背景：液体活检能解决精准医疗的痛点

　　《MIT技术评论》杂志将液体活检技术列为2015年十大突破技术之一，截止2015年底仅CTC领域的研究论文就超过17000篇。

　　作为体外诊断的一个分支，液体活检是指一种非侵入式的血液测试，能监测肿瘤或转移灶释放到血液的循环肿瘤细胞(CTC)和循环肿瘤DNA(ctDNA)碎片，是检测肿瘤和癌症、辅助治疗的突破性技术。它主要对于非固体生物样本的取样和分析，主要指血液。相比唾液、尿液等体液，血液携带的信息量最大，原因在于肿瘤是与血液中的免疫系统高度接触的，具有不可替代性。

　　液体活检的来源包括CTC(循环肿瘤细胞)、ctDNA(循环肿瘤DNA)、microRNA(循环microRNA)、Exosome(外泌囊泡小体)等四种，前面两种目前在业界相对热门。microRNA稳定性不好，因此可靠性不强;Exosome本质上与ctDNA是同源的。

　　(二)主要技术比较：CTC与ctDNA的应用

　　从应用领域来看，液体活检广泛应用于唐氏综合症等先天性疾病、性别和亲子鉴定、器官排异、以及糖尿病、肿瘤和癌症的预测和治疗。CTC技术和ctDNA技术应用有所不同，CTC细胞携带除基因外更多的信息，但在血液中分布稀少，仅限于数量检测。单细胞扩增技术，将会进一步推动CTC的发展。血液中ctDNA含量多，携带的DNA信息量远大于CTC，分子检测也更加容易。

　　CTC是由实体瘤或转移灶释放的，进入外周血循环的肿瘤细胞，侧重于细胞病理，适用于化疗;ctDNA是肿瘤细胞释放到血液循环系统中的DNA，侧重基因层面，获取突变信息，适用于靶向用药。

　　用途上，CTC主要用于前端，包括疑似癌症时的辅助诊断、早期癌症的复发监测，以及晚期癌症的化疗;ctDNA主要用于晚期癌症的靶向治疗(伴随诊断)，若应用在早期，将有更大的市场空间。

　　技术上，CTC侧重于细胞病理，ctDNA则采用获取分子层面突变信息的技术手段。就目前可实现的技术而言，突破单纯的数量检测，CTC实现辅助诊断、ctDNA实现靶向用药指导，是大规模商业化的主要方向。

　　1)CTC技术的分离与检测

　　第一代粗分离技术：

　　通过细胞筛、密度梯度离心将CTC出来，理论依据在于认为侵蚀性细胞的大小、密度与其他细胞不同，通过这一特性可以将CTC分离出来，但荷兰科学家发现，存在大量侵蚀性的细胞是小细胞，而非传统认知中的大细胞;细胞筛、密度离心技术价格低廉，性价比高，但临床检测效果很差。

　　第二代免疫磁珠技术：

　　通过正向、负向筛出CTC细胞，强生已经将这块技术产业化;正向磁珠直接捕获CTC，相对于前面两种技术来说，灵敏度大幅提升，能够提出更纯的细胞，但磁珠价格较贵;负向磁珠捕获非CTC细胞留下CTC细胞，性价比、灵敏度均优于正向磁珠。

　　第三代芯片技术：

　　包括准芯片、微流式技术，准芯片将大小、密度、正负向集成到芯片上去，以筛出CTC。准芯片的性价比也非常高，但是没有从根本上解决灵敏度问题;微流式技术能够解决灵敏度问题。

　　分离CTC后接着是检测步骤，CTC检测技术主要为三类：细胞免疫荧光技术，最为普遍;普通PCR;靶向PCR技术，灵敏度非常高，更适合CTC检测在临床的开展。

　　2)ctDNA技术的分离与检测

　　循环肿瘤 DNA(Circulating Tumor DNA，ctDNA)是进入血液的肿瘤细胞死亡、破损后释放的 DNA。与 CTC 不同，ctDNA 在中国有 95%的临床医生认可其临床价值，原因主要在于 ctDNA 的发现早于 CTC，因此教育市场的时间也相对较早。

　　第一代Sanger测序：

　　灵敏度高达 10%，改进后出现焦磷酸测序技术;

　　第二代为ARMS：

　　灵敏度降低到 1%，国际上最早为 Qiagen公司收购，国内主要是厦门艾德、雅康博涉及该技术;后面出现 digital PCR 技术、 ARMS PLUS 技术、融合了荧光 qPCR 和流式细胞仪的 BEAMING 技术以及目前非常热门的NGS 技术，但目前由于价格过高，尚处于临床试验阶段。