刘沛：揭秘液体活检，一管血的故事！

　　世界医疗网讯    随着精准治疗的深入人心，精准医学已如一股飓风席卷全球。液体活检作为大热技术之一又是如何简单、方便、快速的做到精准判断的呢?请聆听来自北京鑫诺美迪基因检测技术有限公司CEO刘沛博士的精彩分析。

　　一、液态活检已成为临床肿瘤学的“显学”

　　国内当前液体活检领域是一个什么现状?其学术意义和临床应用前景也越来越明朗。液态活检按照检测对象分类，主要可以分为核酸层面的ctDNA和细胞层面的循环肿瘤细胞(CTC)以及外泌体。

　　液体活检已经被MIT Technology Review杂志评为2015年度十大突破技术之一，2015年12月《NSCLC血液EGFR基因突变检测中国专家共识》规范中国EGFR血液检测，推动肺癌精准治疗，这无疑显示了这项技术的巨大进步以及在临床应用中的巨大潜力。可能在几年前，液态活检技术还仅限于科研层面，但现在凭借着检测技术的发展与成熟，这项技术已经迅速在医疗行业内应用开来，比如NIPT。

　　目前国内的企业在液态活检领域主要集中在CTC和cfDNA，外泌体还鲜有涉及。外泌体一词最早出现在1981年(Biochim.Biophys.Acta.645,63-70,1981)，但是直到2007年发现外泌体可作为细胞间基因交流的机制(包括mRNA和miRNA)，才重新激发了人们对外泌体领域的兴趣(Nat. Cell Biol. 9, 654–659, 2007)。CTC的富集主要包括物理学、免疫学以及材料学，检测方法包括分子生物学、免疫学和流式细胞术等。主流的cfDNA检测技术主要包括ARMS-PCR和NGS，其他的还有数字PCR、BEAMing、CAPP-seq等。数字PCR虽然有更高的灵敏度且可定量，但是由于多种原因，现阶段在临床上并不容易推广，如仪器牌照问题和配套试剂成本的问题。

　　今天我主要分享液态活检在肿瘤领域的应用。相信很多人都看到了2016年发布《2012年中国恶性肿瘤发病和死亡分析》报告，其中肺癌每年新发病例数为70多万。火石地图对液态活检的市场规模预计有216亿元。一方面我们会为肿瘤发病率震惊，另一方面我们又在感叹市场规模。

　　言归正传，回到主题。

　　传统的肿瘤检测方式存在许多局限：例如组织活检，需要患者进行手术从肿瘤上取样切片，这给患者带来很大痛苦，并且不能频繁进行。它只能对单一器官进行检测，局限性也非常大，不适合在常规体检时使用。更严重的是，从肿瘤上切片提取组织会对肿瘤进一步刺激，容易激发癌细胞的快速增长。

　　液态活检的好处在于，它可以使医生频繁监测肿瘤的发展：只需通过抽血，就可以在人体的循环血液中检测ctDNA(死亡肿瘤细胞上脱落释放的小片段肿瘤基因)从而快速确定一项治疗方案是否适合患者。如果治疗方案无效，可以立即放弃，避免患者遭受副作用之苦，也可以让医生尽早尝试替代方案。

　　液态活检技术在临床上应用主要有：1. 检测晚期患者的突变信息，找到有效的靶向药物;2. 动态监测正在服用靶向药物的患者，检测是否发生耐药突变，指导换药;3. 早期筛查肿瘤，防“未病”。

　　液态活检是一种技术，更是一种临床解决方案。在液态活检的背景下可以有很多应用，包括临床和面对消费者。当前基因检测的靶点主要包括DNA的突变、基因扩增、基因融合、缺失/插入等，这种是一种不可逆的变化。

　　而DNA的变化远远不止这些，一些表观修饰会对基因功能产生影响，进而影响细胞功能和个体健康，如基因启动子区的甲基化发生在多数情况下会抑制转录因子与启动子的结合，激活或抑制基因的功能。拿一个常见的例子说明，很多人喜欢健身塑体，在肌肉的强化过程中，就包含了特定基因的甲基化动态变化过程。这种动态监测过程，不可能多次获取组织，通过无创的液态活检可以实现多次、实时的监控。我们会逐渐发现这种技术会在很多层面的应用。

　　二、鑫诺美迪在液体活检领域的技术和优势

　　鑫诺美迪在液态活检领域主要检测标志物是ctDNA，技术平台包括AMRS-PCR和NGS。首先我们关注ctDNA，是因为ctDNA在临床上更容易推广应用，从抽血到提取ctDNA并不需要额外设备，只需严格按照操作说明即可得到高质量的ctDNA。

　　CtDNA的检测，大家可能更关注采用什么技术平台去完成，但是鑫诺美迪更关注的是流程。首先鑫诺和合作单位设计了高效率的ctDNA提取，更高效的富集血浆中的ctDNA，这也是后续检测的源头，我们目前只需要提取200-600uL血浆中的核酸即可满足后续检测。在检测的技术平台上，鑫诺对ARMS-PCR和NGS技术的关注点也不同。对于ARMS-PCR技术，我们更多要求的是灵敏度和特异性，我们对传统的AMRS-PCR技术进行了改进，该技术命名为AMRS-PLUS。