免疫标记技术

         免疫标记技术是当今医学检验实践中应用得最为广泛的一类技术，用于POCT的免疫标记技术主要是胶乳技术、胶体金按术、酶免疫技术等。

    (一)胶乳技术

    聚苯乙烯胶乳是一种直径约为0.8μｍ大小带负电荷的圆形颗粒，具有物理吸附蛋白质分子的特性，可作为载体结合抗原或抗体而用于胶乳凝集和凝集抑制试验中。获取结果既可以直接通过肉眼观察颗粒的凝集程度进行定性或半定量的检测，又可以与光散射或光透射原理联合应用，检测颗粒凝集后散射光或透射光的变化达到定量检测。一般来说，由于聚苯乙烯颗粒表面未经修饰，与蛋白质的结合牢固度较差，制备的免疫胶乳稳定性也较差，保存期短。为了克服这一缺点，通过对聚苯乙烯颗粒表面进行修饰，将一些化学活性基团（如羧基、丙烯酸、氨基、羟基等）联接在颗粒表面，制备成具有化学活性基团的颗粒。根据抗原或抗体的不同性质，选择具有合适的化学活性基团修饰的胶乳颗粒和适当的方法进行共价交联，从而制备出各种性能优良、保存期长的免疫胶乳。

    (二)免疫胶体金技术

    氯金酸(HAuCI4)在还原剂的作用下，可聚合成一定大小的金颗粒，形成带负电荷的疏水胶溶液，静电作用使成为稳定的胶体状态，故称为胶体金。由于胶体金带负电荷，对蛋白质分子上的正电荷基团具有很强的静电吸附作用，可与多种蛋白质分子（葡萄球菌A蛋白、免疫球蛋白、毒素及糖蛋白等）以非共价结合，是基础研究和临床实验中一种非常有用的工具。

    免疫胶体金技术(immuno-gold labeling technique)主要利用了金颗粒具有高电子密度的特性，显微镜下可见在金标蛋白的结合处有黑褐色颗粒。当此类标记物在相应配体处大量聚集时，可形成肉眼可见的红色或粉红色斑点进行定性判断，或通过相应的仪器作半定量或定量测定。

    免疫胶体金技术的原理是以微孔滤膜（硝酸纤维素膜）为载体，在其上包被已知抗原或抗体，样本加入后，经过渗滤作用或毛细管虹吸作用通过包被有抗原或抗体的滤膜。若样本中含有待测物质，其与载体上的抗原或抗体反应结合而被固化。然后加入已经抗原或抗体标记的胶体金溶液，标记于胶体金上的抗原或抗体与固化在载体上的待测物质反应结合，形成抗原-待测物质-抗原-胶体金（或抗体-待测物质-抗体-胶体金）复合物，产生红色斑点。根据斑点颜色的深浅，可达到定性、半定量或定量的检测。