免疫表型分析

　　免疫表型分析

免疫表型分析主要根据不同类型不同时期的血液恶性肿瘤其肿瘤细胞出现的抗原时序混乱表达、抗原跨系表达及分化阻滞等现象，通过流式细胞术免疫荧光染色法，比较分析分化抗原在肿瘤细胞和正常造血细胞上表达的异同，从而对血液恶性肿瘤进行诊断、分型及预后判断，并为选择治疗方案提供依据。

　　（一）分化抗原

分化抗原（cluster of differentiation，CD）是造血细胞在分化成熟过程中，不同系列、不同分化阶段及活化过程中出现或消失的细胞表面标志。CD主要表达于白细胞，人类白细胞分化抗原工作组依据以单克隆抗体鉴定为主的聚类分类法，将抗体识别的同一种分化抗原归为同一个分化群。目前，已命名了300多个CD，并按照CD分布的细胞不同，分为T细胞、B细胞、NK细胞、髓细胞／单核细胞、血小板、黏附分子、内皮细胞、细胞因子受体、树突状细胞、干／祖细胞、红细胞和活化抗原等12类标志。

急性白血病初筛常用的CD有CD45、胞质（cytoplasm，c）CD3和（或）CD3、CD2、CD5、CD7、cCD22或cCD79a、MPO、CD19、CD10、CD13、CD33、CD14、CD34、HLA-DR、CD41、血型糖蛋白A（glycophorin A，GlyA）等。CD45用于CD45／侧向角散射光（side scatter，SSC）设门法确定异常细胞群，要求每一测试管均需加入同一荧光素标记的CD45。cCD3和（或）CD3、CD2、CD5、CD7、cCD22或cCD79a、CD19、CD10是淋系标志，其中，cCD3和（或）CD3、CD2和CD7是T细胞系标志，cCD3和（或）CD3是T细胞系特异性标志；cCD22或cCD79a是B细胞系特异性标志。MPO是髓系特异性标志，CD14对单核细胞系更特异；CD41是巨核细胞系标志；GlyA是红系标志；CD34、HLA-DR是非系列特异性抗原。

图1-1显示了白血病免疫表型分析的流式细胞仪测定图，在CD45／SSC散点图中，R2区域（绿色）为CD45强表达／SSC偏小的成熟淋巴细胞群，R3区域为CD45弱表达／SSC偏小的原始／幼稚细胞群，R4区域为CD45中等表达／SSC偏大的幼稚／成熟粒细胞群，R5区域为CD45强表达／SSC中等大小的幼稚／成熟单核细胞群，R6区域为CD45不表达／SSC偏小的细胞碎片、红细胞或其他来源的细胞群。R3区域的原始／幼稚细胞增多，表达原始和髓系标志CD117、CD34、CD13。R5区域的细胞明显增多，表达髓系分化标志CD15、CD13，异常表达CD56。R3和R5区域的两群细胞均不表达T细胞标志cCD3及B细胞标志CD19，而R2区域的淋巴细胞表达cCD3和CD19。R4区域的粒细胞表达CD15和CD13。

（二）白血病抗原的表达

1.抗原表达异常  与该阶段正常细胞相比，抗原表达过强、过弱，或正常抗原丢失；表达其他系列抗原；不同成熟时相的抗原同时表达；物理性质（细胞大小或者颗粒性）发生变化；原本表达异质性的抗原，变得表达均匀一致。

2.成熟淋巴细胞出现单克隆性  B细胞单克隆表达膜免疫球蛋白轻链，只表达kappa或者lambda；浆细胞单克隆表达胞质免疫球蛋白轻链，只表达ckappa或者clambda；NK细胞单克隆表达KIR；T细胞单克隆表达TCRVβ。

3.正常标本中罕见细胞的比例明显升高  注意排除肿瘤。